Entwicklung eines monoklonalen Sandwich-ELISA zur direkten Detektion von Blauzungenvirus in infizierten Tieren
von Johannes KohlDie Blauzungenkrankheit (Bluetongue disease, BT) ist eine anzeigepflichtige virale Infektionskrankheit bei Wiederkäuern und kann bei betroffenen Tieren zu schweren Krankheiten bis hin zu Todesfällen und damit zu erheblichen wirtschaftlichen Einbußen führen. Zum direkten Nachweis des BT Virus (BTV) sind derzeit verschiedene real-time RT PCR-Kits zugelassen. Ein indirekter Nachweis von BTV spezifischen Antikörpern erfolgt über kompetitive ELISA Verfahren.
In der vorliegenden Doktorarbeit sollte ein rekombinanter rein monoklonaler Sandwich-ELISA zur direkten Detektion von BTV-8 Viruspartikeln im infizierten Tier hergestellt werden. Mittels der Phage-Display-Technologie konnten durch Selektion auf aufgereinigten Viruspartikel drei einzigartige humane BTV-8 spezifische scFv-Antikörperfragmente aus den humanen Tomlinson-Bibliotheken I und J isoliert werden.
Nach Konvertierung der scFv-Antikörper in BTV-8 Fab-Fragmente und BTV-8 scFv-Fc-Antikörper-Fusionsproteine konnten die Sandwich-ELISAs gegen
BTV-8 Viruspartikel etabliert werden. Hierzu wurden als Fängerantikörper die entsprechenden BTV-8 Fab-Fragmente eingesetzt. Als Detektionsantikörper wurden die BTV-8 scFv-Fc-Fusionsproteine verwendet. Die BTV-8 Sandwich-ELISAs können sowohl aufgereinigte BTV-8 Viruspartikel, als auch BTV-8 Viruspartikel im Serum eines infizierten Schafes detektieren.
Die Nachweisgrenze (LOD) der BTV-8 Sandwich-ELISAs liegt bei 104 bzw. bei 105 infektiöse BTV-8 TCID50. Weitere Tests des BTV-8 Sandwich-ELISAs auf Viruspartikel der Serogruppen BTV-1, BTV-4, BTV-16 ergab, dass keine der untersuchten BTV Serogruppen, außer der BTV-8 Serogruppe detektiert wurden. Dies zeigt, dass dieser BTV-8 Sandwich-ELISA hochspezifisch BT 8 Viruspartikel erkennt.
Die in dieser Arbeit entwickelten BTV-8 Sandwich ELISAs eignen sich zum sicheren Direktnachweis von BTV-8 Viruspartikeln. Somit steht ein weiteres Testsystem für den direkten Nachweis des Blauzungenvirus zur Verfügung.
In der vorliegenden Doktorarbeit sollte ein rekombinanter rein monoklonaler Sandwich-ELISA zur direkten Detektion von BTV-8 Viruspartikeln im infizierten Tier hergestellt werden. Mittels der Phage-Display-Technologie konnten durch Selektion auf aufgereinigten Viruspartikel drei einzigartige humane BTV-8 spezifische scFv-Antikörperfragmente aus den humanen Tomlinson-Bibliotheken I und J isoliert werden.
Nach Konvertierung der scFv-Antikörper in BTV-8 Fab-Fragmente und BTV-8 scFv-Fc-Antikörper-Fusionsproteine konnten die Sandwich-ELISAs gegen
BTV-8 Viruspartikel etabliert werden. Hierzu wurden als Fängerantikörper die entsprechenden BTV-8 Fab-Fragmente eingesetzt. Als Detektionsantikörper wurden die BTV-8 scFv-Fc-Fusionsproteine verwendet. Die BTV-8 Sandwich-ELISAs können sowohl aufgereinigte BTV-8 Viruspartikel, als auch BTV-8 Viruspartikel im Serum eines infizierten Schafes detektieren.
Die Nachweisgrenze (LOD) der BTV-8 Sandwich-ELISAs liegt bei 104 bzw. bei 105 infektiöse BTV-8 TCID50. Weitere Tests des BTV-8 Sandwich-ELISAs auf Viruspartikel der Serogruppen BTV-1, BTV-4, BTV-16 ergab, dass keine der untersuchten BTV Serogruppen, außer der BTV-8 Serogruppe detektiert wurden. Dies zeigt, dass dieser BTV-8 Sandwich-ELISA hochspezifisch BT 8 Viruspartikel erkennt.
Die in dieser Arbeit entwickelten BTV-8 Sandwich ELISAs eignen sich zum sicheren Direktnachweis von BTV-8 Viruspartikeln. Somit steht ein weiteres Testsystem für den direkten Nachweis des Blauzungenvirus zur Verfügung.