Templatgesteuerte Festphasensynthese

In der vorliegenden Arbeit wurde eine Festphasensynthese auf einem DNA-Templat etabliert, welche die schrittweise Verlängerung eines 3'-aminoterminalen Oligonukleotids erlaubt. Diese sogenannte templatgesteuerte Festphasensynthese kombiniert Aspekte der chemischen Primerverlängerung mit Aspekten der Festphasensynthese von Oligonukleotiden bzw. Peptiden. Als Monomere für die Verlängerungsreaktionen dienten die 7-Azabenzotriazol-Aktivester der 3' Amino-2',3'-didesoxynukleosid-5'-monophosphate mit einer Azidomethyloxycarbonyl-(Azoc) geschützten 3'-Aminofunktion. Mit den Azoc-geschützten Monomeren und der in der vorliegenden Arbeit erstmals beschriebenen Festphase wurden templatgesteuerte Festphasensynthesen auf gemischten DNA-Templatsequenzen durchgeführt. Dabei wurden nach jedem templatgesteuerten Verlängerungsschritt überschüssige Monomere durch magnetische Separation von der Festphase und somit den Oligonukleotiden abgetrennt. Vor dem nächsten Verlängerungsschritt wurde die Azoc-Schutzgruppe über eine Staudinger-Reduktion mit dem wasserlöslichen Tris(2-carboxyethyl)phosphan (TCEP) unter nicht denaturierenden Bedingungen abgespalten. Bei Zugabe des jeweils richtigen Monomers konnten zehn aufeinanderfolgende Verlängerungsreaktionen und bei Zugabe einer Mischung der vier Monomere konnten acht aufeinanderfolgende Verlängerungsreaktionen erreicht werden, wobei jeweils das korrekte Verlängerungsprodukt als Hauptprodukt nachgewiesen werden konnte.